FBL10 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403232

Descripción general

KDM2B codifica la proteína humana FBL10, una desmetilasa de lisina en histonas con dominio JmjC que reconoce ADN rico en CpG mediante su dedo de zinc CxxC y modula la accesibilidad de la cromatina. FBL10 participa en la represión transcripcional asociada a Polycomb y ayuda a coordinar programas epigenéticos que controlan la progresión del ciclo celular, el compromiso de linaje y el mantenimiento de la identidad celular. A través de la regulación de los estados de metilación de histonas y de la actividad de promotores y potenciadores (enhancers), KDM2B influye en vías que gobiernan la proliferación y la diferenciación. La actividad desregulada de KDM2B y las alteraciones en su direccionamiento hacia la cromatina se han vinculado con estados transcripcionales oncogénicos y fenotipos aberrantes similares a células madre en diversos contextos oncológicos y hematopoyéticos, lo que lo convierte en un locus útil para estudios mecanísticos del control epigenético.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FBL10 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KDM2B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KDM2B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KDM2B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FBL10.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KDM2B para la investigación de la señalización de FBL10, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KDM2B críticos para la función de FBL10
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KDM2B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FBL10 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FBL10 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KDM2B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FBL10 (h) y el plásmido HDR FBL10 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KDM2B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KDM2B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.