Plásmido Doble Nickase (h) FAT1: sc-410778-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FAT1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FAT1 (h) y el plásmido de doble nickasa FAT1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FAT1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FAT1 Anticuerpo (1634CT464.1.9): sc-517329
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FAT1 | sc-410778-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FAT1 | sc-410778-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAT1 codifica una cadherina atípica que actúa como un gran regulador transmembrana de la adhesión celular y de la polaridad, coordinando la organización del citoesqueleto, procesos similares a la polaridad planar y la señalización dependiente del contacto. FAT1 se ha relacionado con la modulación de la salida de la vía Hippo y con el diálogo cruzado con programas asociados a Wnt/β-catenina, influyendo en la migración celular, la arquitectura tisular y la mecanotransducción. Se ha descrito actividad desregulada o mutaciones de FAT1 en múltiples tipos de tumores y también se asocia con fenotipos del desarrollo y renales, lo que respalda su amplia relevancia para estudios de la morfogénesis y la integridad epitelial. En células humanas en cultivo, la perturbación de FAT1 se utiliza comúnmente para investigar la señalización dependiente de la adhesión, la dinámica de invasión y el control de la polaridad.
FAT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FAT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FAT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FAT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FAT1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.