FAS Double Nickase Plasmid (m): sc-420287-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FAS Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FAS Double-Nickase-Plasmid (m) und FAS Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Fas abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FAS: sc-21730
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FAS Double Nickase Plasmid (m) | sc-420287-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FAS Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420287-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fas kodiert den Todesrezeptor FAS (CD95/TNFRSF6), einen zentralen Initiator der extrinsischen Apoptose nach Bindung des FAS-Liganden und Assemblierung des „death-inducing signaling complex“ (DISC). Die Rezeptoraktivierung rekrutiert FADD und fördert die Aktivierung von Caspase‑8, wodurch nachgeschaltete Effektor-Caspasen aktiviert werden und – in bestimmten Kontexten – eine mitochondriale Verstärkung über die Spaltung von BID erfolgt. Über die Apoptose hinaus kann die FAS-Signalübertragung mit NF‑κB- und MAPK-Signalwegen verknüpft sein und so die Immunhomöostase, periphere Toleranz und Entzündungsprozesse beeinflussen. Eine Fehlregulation der FAS-Aktivität wird mit unzureichender Lymphozytendeletion, autoimmunen Phänotypen und einer veränderten Anfälligkeit für tumorvermittelte Immunflucht in Verbindung gebracht, weshalb murines Fas häufig als Untersuchungsziel für mechanistische Studien in Immunologie und Zelltodforschung dient.
FAS Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Fas-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Fas abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Fas-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Fas-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.