Particules Lentivirales d'Activation (m) FAPα: sc-420286-LAC

La protéine Fap de la souris code la protéine d’activation des fibroblastes alpha (FAPα), une protéase à sérine transmembranaire de type II présentant des activités de dipeptidyl peptidase et de gélatinase/collagénase, qui contribue au remodelage de la matrice extracellulaire. FAPα est enrichie dans les fibroblastes activés et les populations stromales périvasculaires, et soutient des processus tels que les interactions cellule–matrice, le remodelage tissulaire et la régulation des signaux inflammatoires du stroma. Par ses effets sur le renouvellement de la matrice et la signalisation paracrine, FAPα est étudiée dans des contextes incluant la fibrose, la réparation des plaies et les composantes stromales des microenvironnements tumoraux. Ces fonctions font de Fap une cible utile pour disséquer les programmes d’activation des fibroblastes, les réseaux de signalisation associés à la MEC et les transitions d’état cellulaire dans des systèmes de modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales FAPα (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Fap dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FAPα (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Fap, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FAPα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Fap ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.