Plasmide Double Nickase (h) FAM73B: sc-413719-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FAM73B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FAM73B Double Nickase (h) et le plasmide FAM73B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MIGA2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FAM73B | sc-413719-NIC | 20 µg | $410.00 |
MIGA2 (FAM73B) code une protéine de la membrane externe mitochondriale qui contribue à la morphologie des mitochondries en favorisant la fusion des organites et en maintenant l’intégrité du réseau. Par son rôle dans la dynamique mitochondriale, FAM73B influence le métabolisme énergétique, l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et la communication entre les mitochondries et le réticulum endoplasmique, susceptible d’affecter les réponses cellulaires au stress. La perturbation de l’équilibre fusion–fission des mitochondries est impliquée dans la dérégulation métabolique et dans des processus plus larges tels que l’apoptose et la signalisation de l’immunité innée. Des altérations de l’activité de FAM73B ont été étudiées dans le contexte de phénotypes associés à une dysfonction mitochondriale, pertinents pour le métabolisme des cellules cancéreuses et la neurobiologie.
FAM73B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MIGA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MIGA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MIGA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MIGA2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.