FAM55D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412343

Übersicht

NXPE4 kodiert das menschliche Protein FAM55D, ein Mitglied der Neurexophilin- und PC-Esterase-Domänen-Proteinfamilie, das vermutlich sezerniert oder membranassoziiert ist und insbesondere in neuronalen Kontexten angereichert vorkommt. Obwohl seine molekulare Funktion bislang nicht vollständig charakterisiert ist, deuten die Merkmale der Proteinfamilie auf Rollen bei extrazellulären Proteininteraktionen sowie bei Prozessen der Zell-Zell-Kommunikation hin, die die neuronale Konnektivität und synaptische Organisation beeinflussen können. Transkriptvarianten und gewebespezifische Expressionsmuster wurden in Genomik-Datensätzen untersucht, was weitere Studien zu NXPE4 in der Neurobiologie und in den regulatorischen Netzwerken unterstützt, die die Entwicklung und Funktion des Gehirns prägen. Eine veränderte Expression von NXPE4 wurde in Assoziationsstudien in krankheitsrelevanten Kohorten berichtet, was mechanistische Untersuchungen motiviert, um zu klären, wie eine Störung dieses Gens zelluläre Phänotypen beeinflusst.

Das FAM55D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NXPE4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NXPE4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NXPE4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAM55D-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NXPE4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAM55D-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NXPE4-Exone abzielen, die für die FAM55D-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NXPE4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAM55D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FAM55D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NXPE4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAM55D HDR-Plasmid (h) und FAM55D HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NXPE4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NXPE4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.