Plasmide Double Nickase (h) FADS1: sc-404735-NIC

FADS1 code la désaturase des acides gras 1, une Δ5‑désaturase qui catalyse une étape clé limitante de la biosynthèse des acides gras polyinsaturés à longue chaîne, en convertissant l’acide dihomo‑γ‑linolénique en acide arachidonique, ainsi que des substrats apparentés, en précurseurs d’eicosanoïdes en aval. En régulant la composition lipidique des membranes et la disponibilité des médiateurs lipidiques, FADS1 influence la signalisation inflammatoire, l’homéostasie métabolique et des processus de signalisation cellulaire liés au remodelage des phospholipides et au métabolisme de l’acide arachidonique. Des variations génétiques et une expression altérée de FADS1 ont été associées à des modifications des profils lipidiques circulants et à une susceptibilité à des traits complexes impliquant des phénotypes cardiométaboliques et inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des programmes cellulaires pilotés par les lipides. Dans des modèles de cellules humaines, la perturbation de FADS1 permet d’étudier le flux métabolique, la dynamique membranaire et des réponses transcriptionnelles dépendantes des médiateurs lipidiques.

FADS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FADS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FADS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FADS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FADS1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.