Plásmido CRISPR de Activación (h) FADD: sc-400580-ACT

La FADD humana (proteína asociada a Fas con dominio de muerte) es una molécula adaptadora que transduce señales desde receptores de muerte, incluidos FAS y miembros de la familia TNFRSF, para iniciar la apoptosis extrínseca. Al conectar los complejos receptores con caspasas iniciadoras como CASP8 mediante interacciones homotípicas del dominio de muerte, FADD regula la activación de la cascada de caspasas, la muerte celular programada y la homeostasis inmunitaria. Además de la apoptosis, FADD influye en la señalización de NF-κB, las respuestas inflamatorias y el control del ciclo celular de manera dependiente del contexto. La desregulación de la señalización de FADD se ha implicado en una competencia apoptótica alterada y en la disfunción inmunitaria observadas en diversos modelos de cáncer y enfermedades inflamatorias.

FADD El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FADD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FADD El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FADD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FADD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FADD. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FADD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FADD en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FADD en células tumorales con expresión de FADD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.