Plasmide Double Nickase (h) Factor XIII B: sc-403574-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Factor XIII B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Factor XIII B Double Nickase (h) et le plasmide Factor XIII B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant F13B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Factor XIII B Antibody (GMA-033): sc-65957
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Factor XIII B | sc-403574-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Factor XIII B | sc-403574-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F13B code la sous-unité B du facteur de coagulation XIII, une protéine porteuse non catalytique qui stabilise la sous-unité A (F13A1) dans le plasma et en régule la disponibilité pour l’activation durant la phase terminale de la cascade de coagulation. Après l’activation du facteur XIII dépendante de la thrombine et du calcium, l’activité transglutaminase de la sous-unité A réticule la fibrine et d’autres protéines de la matrice extracellulaire, augmentant la résistance mécanique du caillot et sa résistance à la fibrinolyse. Par ces mécanismes, la sous-unité B du facteur XIII soutient l’hémostase et fait le lien entre la coagulation et les voies de réparation tissulaire et de remodelage de la matrice. Des perturbations génétiques ou fonctionnelles de F13B sont associées à des phénotypes de déficit en facteur XIII et à une stabilité du caillot altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des troubles hémorragiques et de la biologie thrombo-inflammatoire.
Factor XIII B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus F13B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de F13B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de F13B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de F13B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.