Factor VIII Double Nickase Plasmid (h): sc-400373-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Factor VIII Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Factor VIII Double-Nickase-Plasmid (h) und Factor VIII Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf F8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Factor VIII light chain: sc-59512
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Factor VIII Double Nickase Plasmid (h) | sc-400373-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Factor VIII Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400373-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane **F8**-Gen kodiert den Gerinnungsfaktor VIII, einen glykoproteinischen Kofaktor, der im Blut zirkuliert, an den von-Willebrand-Faktor gebunden ist und im intrinsischen Weg durch Thrombin aktiviert wird. Aktivierter Faktor VIII (FVIIIa) bildet zusammen mit Faktor IXa auf Phospholipidoberflächen den intrinsischen Tenase-Komplex, beschleunigt dadurch die Aktivierung von Faktor X und die nachgeschaltete Thrombinbildung innerhalb der Gerinnungskaskade. Loss-of-function-Varianten in **F8** verringern die Effizienz des intrinsischen Weges und sind stark mit Hämophilie A assoziiert; sie bieten damit einen molekularen Ansatzpunkt für die Untersuchung der Hämostase, der endothelial–hepatischen Proteinbiosynthese und der Regulation von Protease-Kofaktoren. Die experimentelle Perturbation von **F8** ermöglicht mechanistische Analysen der Dynamik von Gerinnungsnetzwerken, der Prozessierung und Sekretion von FVIII sowie der Interaktionen mit vWF in humanen Zellmodellen.
Factor VIII Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des F8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von F8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die F8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit F8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.