Factor VII Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402582-ACT

O F7 humano codifica o fator de coagulação VII, um zimogênio de serina protease dependente de vitamina K, sintetizado principalmente em hepatócitos e secretado no plasma. Ao se ligar ao fator tecidual (F3) em locais de lesão vascular, o fator VIIa ativado inicia a cascata de coagulação extrínseca ao ativar proteoliticamente o fator X (F10) e o fator IX (F9), amplificando a geração de trombina e a formação de fibrina. Essa via se cruza com a biologia endotelial e plaquetária e pode sinalizar por meio de receptores ativados por proteases (PARs), influenciando a inflamação vascular e o equilíbrio hemostático. A atividade ou expressão desregulada de F7 está associada a fenótipos hemorrágicos e a risco trombótico, tornando-o um alvo relevante para estudar a regulação das vias de coagulação e as relações genótipo–fenótipo.

Factor VII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de F7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Factor VII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus F7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição F7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Factor VII. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus F7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Factor VII no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Factor VII em células tumorais com expressão de F7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.