F-Spondin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433292

Panoramica

Spon1 codifica F-Spondin, una glicoproteina associata alla matrice extracellulare che, durante lo sviluppo e il rimodellamento del sistema nervoso centrale, funge da segnale guida per gli assoni e da cue di adesione neuronale. F-Spondin interagisce con recettori di superficie cellulare e proteoglicani per modulare la crescita dei neuriti, la migrazione cellulare e l’organizzazione sinaptica, ed è comunemente associata alla segnalazione della matrice extracellulare e ai processi di rimodellamento della matrice dipendenti da proteasi. Nei tessuti murini, l’espressione di SPON1 è stata utilizzata per indagare le vie alla base della definizione dei pattern neurodevelopmentali e della plasticità associata a lesioni, nonché i cambiamenti microambientali vascolari e infiammatori. Alterazioni della biologia di SPON1/F-Spondin sono state esplorate nel contesto di fenotipi neurologici e rilevanti per la neurodegenerazione, in cui la segnalazione dipendente dalla matrice extracellulare può plasmare la connettività neuronale e l’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO F-Spondin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Spon1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Spon1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Spon1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina F-Spondin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Spon1 per lo studio della segnalazione di F-Spondin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Spon1 critici per la funzione di F-Spondin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Spon1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal F-Spondin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal F-Spondin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Spon1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal F-Spondin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR F-Spondin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Spon1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Spon1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.