Plásmido CRISPR de Activación (h) Exportin 5: sc-403402-ACT

XPO5 codifica la exportina 5, un receptor de exportación nuclear dependiente de RanGTP que transporta pre-miARN y determinados ARN estructurados desde el núcleo al citoplasma, lo que permite su procesamiento posterior por DICER y el ensamblaje de los complejos de silenciamiento inducido por ARN. Al controlar el aporte de pre-miARN a la vía citoplasmática de biogénesis de miARN, la exportina 5 influye en la regulación génica posranscripcional, los programas de diferenciación celular, las respuestas al estrés y la proliferación. La alteración de la expresión de XPO5 o de su actividad de transporte puede remodelar los perfiles globales de miARN y las redes transcripcionales posteriores, por lo que resulta relevante en estudios de señalización oncogénica, fenotipos asociados a la metástasis y estabilidad del genoma. La exportina 5 también se integra en procesos más amplios de transporte nucleocitoplasmático coordinados por el ciclo de Ran, conectando el tráfico de ARN con la organización nuclear y la homeostasis de la expresión génica.

Exportin 5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de XPO5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Exportin 5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus XPO5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional XPO5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Exportin 5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo XPO5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Exportin 5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Exportin 5 en células tumorales con expresión de XPO5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.