Evi-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404112-LAC

Das humane MECOM-Gen kodiert Evi-1, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der Genexpressionsprogramme steuert, die die Selbsterneuerung hämatopoetischer Stamm- und Vorläuferzellen, die Linienfestlegung (Lineage Commitment) und das Zellüberleben kontrollieren. Evi-1 moduliert Chromatin- und transkriptionelle Netzwerke durch Interaktionen mit Koregulatoren und Signalknoten, darunter TGF-β/SMAD-vermittelte transkriptionelle Antworten sowie Signalwege, die Proliferation und Differenzierung regulieren. Eine fehlregulierte MECOM/Evi-1-Aktivität ist mit aberranter Hämatopoese und onkogener transkriptioneller Reprogrammierung in verschiedenen malignen Kontexten verknüpft, was MECOM/Evi-1 zu einem wertvollen Modell für die Untersuchung von Transkriptionsfaktor-Abhängigkeiten und regulatorischen Schaltkreisen macht. In der Forschung wird MECOM häufig genutzt, um die Nutzung von Enhancern, Veränderungen epigenetischer Zustände und nachgeschaltete Zielgene zu analysieren, die Zellschicksalsentscheidungen prägen.

Evi-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MECOM-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Evi-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MECOM-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Evi-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MECOM-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.