Plasmide Double Nickase (h) Ets-1: sc-400461-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Ets-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ets-1 Double Nickase (h) et le plasmide Ets-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ETS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ets-1 Antibody (C-4): sc-55581
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Ets-1 | sc-400461-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Ets-1 | sc-400461-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ETS1 code le facteur de transcription Ets-1, membre de la famille ETS, qui se lie à des motifs cœur GGAA/T pour réguler des programmes géniques contrôlant le développement des lymphocytes, la signalisation des cytokines et la migration cellulaire. Ets-1 intègre des signaux issus des voies MAPK/ERK et JAK/STAT afin de moduler les réponses transcriptionnelles lors de l’activation et de la différenciation immunitaires. Une activité d’ETS1 dérégulée a été associée à une altération de l’homéostasie immune, à une signalisation inflammatoire accrue et à un contrôle anormal de la prolifération et de l’invasion dans divers contextes pathologiques, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée en biologie des réseaux transcriptionnels. Dans les cellules humaines, la fonction d’ETS1 est couramment examinée pour cartographier l’utilisation des enhancers, l’occupation de la chromatine et les effecteurs en aval impliqués dans des phénotypes liés à l’immunité et au cancer.
Ets-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ETS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ETS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ETS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ETS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.