Plasmide Double Nickase (m) Estrogen Receptor beta: sc-420232-NIC

Esr2 chez la souris code le récepteur des œstrogènes bêta (ERβ), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui agit comme facteur de transcription en régulant des gènes impliqués dans la biologie de la reproduction, la signalisation neuronale, la modulation immunitaire et l’homéostasie tissulaire. Après liaison des œstrogènes, ERβ se fixe sur des éléments de réponse aux œstrogènes et recrute des complexes de corégulateurs afin de moduler l’état de la chromatine et la transcription au sein des réseaux de signalisation des hormones stéroïdiennes, avec un important dialogue croisé avec les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT. L’activité d’ERβ influence, de manière dépendante du contexte, le contrôle du cycle cellulaire, les programmes de différenciation, la fonction mitochondriale et l’expression de gènes inflammatoires. Une signalisation Esr2 dérégulée a été associée, dans des modèles murins, à des phénotypes de fertilité altérés, à des changements neurocomportementaux et à une physiopathologie hormono-dépendante pertinente pour des troubles métaboliques et inflammatoires.

Estrogen Receptor beta Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Esr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Esr2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Esr2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Esr2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.