Plásmido CRISPR de Activación (m) Estrogen Receptor beta: sc-420232-ACT

Esr2 codifica el receptor de estrógeno beta (ERβ), un receptor nuclear activado por ligando que se une a elementos de respuesta a estrógenos y coordina programas de transcripción que controlan la proliferación celular, la diferenciación y la homeostasis metabólica en múltiples tejidos. En el ratón, ERβ modula la comunicación cruzada entre la señalización estrogénica y las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT, e interactúa con corre­guladores para moldear la accesibilidad de la cromatina y la dinámica de la expresión génica. La actividad de Esr2 se estudia ampliamente en la biología del tracto reproductor, el desarrollo de la glándula mamaria, el remodelado óseo, la regulación inmunitaria y la neurobiología, donde puede contrarrestar la señalización dependiente de ERα. La señalización desregulada de ERβ o la expresión alterada del receptor se asocia con fenotipos relacionados con el sistema endocrino y se investiga con frecuencia en modelos de mecanismos de enfermedad sensibles a hormonas y de remodelación transcripcional ligada a la inflamación.

Estrogen Receptor beta El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Esr2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Estrogen Receptor beta El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Esr2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Esr2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Estrogen Receptor beta. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Esr2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Estrogen Receptor beta en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Estrogen Receptor beta en células tumorales con expresión de Esr2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.