Estrogen Receptor alpha Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-418925-LAC

O Esr1 de camundongo codifica o receptor de estrogênio alfa (ERα), um receptor nuclear ativado por ligante que funciona como fator de transcrição, conectando a sinalização estrogênica a amplos programas de identidade celular, proliferação e diferenciação. Após a ativação, o ERα liga-se a elementos de resposta ao estrogênio e coopera com cofatores para regular a acessibilidade da cromatina e a transcrição, ao mesmo tempo em que também desencadeia sinalização rápida, não genômica, pelas vias MAPK e PI3K/AKT. A atividade do ERα cruza-se com a sinalização de citocinas e de fatores de crescimento, influenciando o metabolismo, a polarização de células imunes e a remodelação tecidual em órgãos reprodutivos e não reprodutivos. A sinalização desregulada do ERα é amplamente estudada na biologia hormônio-responsiva e nos mecanismos subjacentes à disrupção endócrina, à remodelação associada à inflamação e a redes transcricionais oncogênicas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Estrogen Receptor alpha (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Esr1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Estrogen Receptor alpha (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Esr1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Estrogen Receptor alpha. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Esr1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.