Plásmido CRISPR de Activación (m) Estrogen Receptor alpha: sc-418925-ACT

El gen Esr1 de ratón codifica el receptor de estrógeno alfa (ERα), un receptor nuclear activado por ligando que funciona como factor de transcripción coordinando programas génicos dependientes de estrógenos. Tras la unión de la hormona, ERα se acopla a elementos de respuesta a estrógenos y a complejos de correposición para modular la accesibilidad de la cromatina y la transcripción, además de establecer comunicación cruzada con las vías de señalización MAPK/ERK, PI3K/AKT y de factores de crecimiento. La actividad de ERα influye en la progresión del ciclo celular, la diferenciación, el metabolismo y estados transcripcionales relacionados con la inmunidad, lo que convierte a Esr1 en un nodo central de la regulación endocrina. La señalización desregulada de ERα se utiliza ampliamente como marco molecular para estudiar fenotipos sensibles a hormonas y la reprogramación transcripcional relevante para enfermedad en sistemas mamíferos.

Estrogen Receptor alpha El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Esr1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Estrogen Receptor alpha El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Esr1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Esr1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Estrogen Receptor alpha. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Esr1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Estrogen Receptor alpha en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Estrogen Receptor alpha en células tumorales con expresión de Esr1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.