Plásmido Doble Nickase (h) ERGIC-53: sc-401602-NIC

LMAN1 codifica ERGIC-53, una lectina específica de manosa que recircula entre el retículo endoplásmico (RE), el compartimento intermedio RE–Golgi (ERGIC) y el cis-Golgi para promover el tráfico de determinadas cargas de glicoproteínas. Como parte de la vía secretora temprana, ERGIC-53 coopera con el cofactor MCFD2 para favorecer la salida del RE y el control de calidad de proteínas correctamente plegadas, conectando la captura de carga mediada por lectinas con el transporte dependiente de COPII. La alteración de la clasificación dependiente de LMAN1 puede perturbar la secreción proteica y la homeostasis del RE, por lo que es relevante para estudios de proteostasis, tráfico dependiente de glicosilación y respuestas al estrés de la vía secretora. En humanos, las variantes con pérdida de función de LMAN1 se asocian con una deficiencia combinada de los factores de coagulación V y VIII, lo que proporciona un marco genético para investigar mecanismos de secreción específicos de carga sin implicar uso clínico.

ERGIC-53 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LMAN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LMAN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LMAN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LMAN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.