Plásmido Doble Nickase (h) eRF1: sc-405156-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)eRF1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa eRF1 (h) y el plásmido de doble nickasa eRF1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ETF1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eRF1 Anticuerpo (B-11): sc-365686
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) eRF1 | sc-405156-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) eRF1 | sc-405156-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **ETF1** codifica el factor de liberación eucariota 1 (**eRF1**), un factor esencial de terminación de la traducción que reconoce los tres codones de parada y promueve la hidrólisis del peptidil-ARNt en el sitio A del ribosoma en colaboración con eRF3/GSPT1. A través de su papel central en la proteostasis, eRF1 ayuda a mantener la fidelidad de la traducción del ARNm y limita la lectura a través del codón de parada (stop-codon readthrough), lo que vincula la actividad de ETF1 con el control de calidad ribosomal y con vías de vigilancia como la degradación de ARNm mediada por codones sin sentido (nonsense-mediated mRNA decay). La alteración de la terminación de la traducción puede remodelar la señalización de respuesta al estrés, la carga de plegamiento proteico y programas globales de expresión génica relevantes para la homeostasis celular. Por ello, **ETF1** resulta de interés en estudios sobre control translacional, reconocimiento de codones y mecanismos que acoplan la dinámica ribosomal con desequilibrios del proteoma asociados a enfermedad.
eRF1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ETF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ETF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ETF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ETF1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.