ErbB2/HER2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420218-ACT

Das Mausgen **Erbb2** kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase **ErbB2/HER2**, ein Mitglied der EGFR/ErbB-Familie, das als bevorzugter Heterodimerisierungspartner fungiert und so Wachstumsfaktorsignale verstärkt. Nach der Aktivierung schaltet ErbB2 die **MAPK/ERK**- und **PI3K–AKT**-Signalwege ein, um Proliferation, Überleben, Stoffwechsel und Differenzierung zu steuern, mit zusätzlichen Effekten auf Zelladhäsion und Motilität. Im Mammarepithelium und anderen Geweben trägt die ErbB2-Signalgebung zur Entwicklungsmusterung und Gewebehomöostase bei; ihre Fehlregulation wird широко als Modell für onkogene Signalgebung und veränderten Rezeptortransport genutzt. Da für ErbB2 kein löslicher Ligand bekannt ist, wird seine Aktivität häufig über Veränderungen der Expressionsniveaus, der Dimerzusammensetzung und nachgeschalteter Phosphorylierungsnetzwerke untersucht.

ErbB2/HER2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Erbb2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ErbB2/HER2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Erbb2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Erbb2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ErbB2/HER2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Erbb2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ErbB2/HER2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ErbB2/HER2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Erbb2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.