ErbB2/HER2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400138-ACT

ERBB2 kodiert ErbB2/HER2, ein Mitglied der ERBB-Rezeptor-Tyrosinkinase-Familie, das bevorzugt als Heterodimerisierungspartner für EGFR/ERBB3 fungiert und ligandengesteuerte Signalübertragung verstärkt. HER2-haltige Dimere aktivieren die PI3K–AKT–mTOR- und RAS–RAF–MEK–ERK-Kaskaden und verknüpfen extrazelluläre Signale mit Proliferation, Überleben, metabolischer Umprogrammierung und Zellzyklusprogression. Eine dysregulierte ERBB2-Expression oder veränderte Kopienzahl kann den Rezeptortransport und die Rückkopplungskontrolle stören, die Signalisierungsschwellen im Netzwerk verschieben und Transkriptionsprogramme verändern. Daher wird ERBB2 in der Forschung zur onkogenen Signalbiologie, zum Rezeptor-Crosstalk und zu Mechanismen der Signalwegabhängigkeit in Modellen menschlicher Erkrankungen breit untersucht.

ErbB2/HER2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ERBB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ErbB2/HER2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ERBB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ERBB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ErbB2/HER2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ERBB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ErbB2/HER2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ErbB2/HER2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ERBB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.