Plasmide Double Nickase (h) Eps8: sc-403249-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Eps8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Eps8 Double Nickase (h) et le plasmide Eps8 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EPS8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Eps8 Antibody (F-8): sc-390257
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Eps8 | sc-403249-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Eps8 | sc-403249-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **EPS8** code Eps8, une protéine adaptatrice régulatrice de l’actine qui relie la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase au remodelage du cytosquelette. Eps8 participe à des complexes avec l’EGFR, Abi1 et SOS1 pour moduler la dynamique de l’actine dépendante de Rac, influençant la formation de replis membranaires (ruffling), l’endocytose et la motilité cellulaire. Par ces interactions, **EPS8** fait le lien entre les voies activées par les facteurs de croissance et les changements des programmes d’adhésion et de migration. Une expression et une signalisation dérégulées d’EPS8 ont été associées à des phénotypes invasifs modifiés et à une altération de l’activité des voies oncogéniques, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier, en biologie du cancer, la signalisation couplée au cytosquelette.
Eps8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPS8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPS8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPS8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPS8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.