EpoR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420210

Übersicht

Epor kodiert den Erythropoietinrezeptor (EpoR), einen Zytokinrezeptor vom Typ I, der für das Überleben, die Proliferation und die Differenzierung erythroider Vorläuferzellen in der Maus-Hämatopoese essenziell ist. Die ligandinduzierte Dimerisierung des Rezeptors aktiviert JAK2 und die nachgeschaltete STAT5-Signalübertragung; zusätzlich besteht eine Kopplung an die PI3K–AKT- sowie die MAPK/ERK-Wege, die antiapoptotische Programme und Zellzyklusprogramme regulieren. Die EpoR-Aktivität prägt die Antworten auf hypoxiegetriebene Erythropoietin-Signale und integriert sich in umfassendere Zytokinnetzwerke in Knochenmark und Milz. Eine fehlregulierte EPOR-Signalübertragung wird häufig als Modell genutzt, um Defekte der Erythropoese, Störungen der Zytokinrezeptor-Signalgebung und Mechanismen der Stress-Erythropoese zu untersuchen, die für Anämie und Phänotypen erythroider Hyperproliferation relevant sind.

Das EpoR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Epor-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Epor-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Epor nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EpoR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Epor-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EpoR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Epor-Exone abzielen, die für die EpoR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Epor-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EpoR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom EpoR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Epor-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EpoR HDR-Plasmid (m) und EpoR HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Epor-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Epor-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.