Plasmide Double Nickase (h) EphB3: sc-403039-NIC

EPHB3 code le récepteur tyrosine kinase EphB3, un membre de la famille des récepteurs des éphrines qui assure une signalisation dépendante du contact lors de la liaison à des ligands ephrin‑B ancrés à la membrane. EphB3 régule la communication cellule‑cellule, le remodelage du cytosquelette, l’adhésion et la migration directionnelle via des voies qui croisent les GTPases de la famille Rho, la signalisation MAPK/ERK et des réseaux associés à PI3K. Au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire, EphB3 contribue à la formation de frontières, au guidage axonal et à l’organisation épithéliale, et sa dérégulation est associée à des programmes modifiés d’invasion et de différenciation dans divers contextes cancéreux. Ces propriétés font d’EPHB3 une cible utile pour disséquer les sorties de signalisation pilotées par les récepteurs et le comportement cellulaire dans des systèmes modèles.

EphB3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPHB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPHB3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPHB3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPHB3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.