Plásmido CRISPR de Activación (m) EphA7: sc-420197-ACT

El gen Epha7 de ratón codifica EphA7, una tirosina cinasa receptora dentro del eje de señalización efrina-A/Eph que media la comunicación celular dependiente de contacto para regular el posicionamiento celular, la adhesión y la guía repulsiva. La señalización de EphA7 coordina la remodelación del citoesqueleto a través de GTPasas de la familia Rho y se integra con las vías asociadas a MAPK/ERK y PI3K para influir en la proliferación, la diferenciación y la supervivencia de manera dependiente del contexto. En el sistema nervioso, EphA7 contribuye a la guía axonal, la conectividad neuronal y la formación de fronteras durante el desarrollo, y también se han descrito funciones adicionales en la organización de tejidos epiteliales y mesenquimales. La actividad desregulada de EphA7 se ha asociado con alteraciones del patrón de desarrollo y se ha investigado en procesos relevantes para enfermedades, como la migración/invasión de células tumorales y el control anómalo del crecimiento.

EphA7 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Epha7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EphA7 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Epha7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Epha7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EphA7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Epha7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EphA7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EphA7 en células tumorales con expresión de Epha7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.