EphA7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420197-ACT

O gene murino **Epha7** codifica o **EphA7**, uma tirosina-quinase receptora no eixo de sinalização **ephrin-A/Eph** que medeia a comunicação celular dependente de contato para regular o posicionamento celular, a adesão e a orientação repulsiva. A sinalização de EphA7 coordena a remodelação do citoesqueleto por meio de GTPases da família Rho e integra-se a vias associadas a **MAPK/ERK** e **PI3K** para influenciar proliferação, diferenciação e sobrevivência de maneira dependente do contexto. No sistema nervoso, o EphA7 contribui para a orientação axonal, a conectividade neuronal e a formação de fronteiras durante o desenvolvimento, com papéis adicionais descritos na organização de tecidos epiteliais e mesenquimais. A atividade desregulada de EphA7 tem sido associada a alterações no padrão de desenvolvimento e tem sido investigada em processos relevantes para doenças, como migração/invasão de células tumorais e controle anômalo do crescimento.

EphA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Epha7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EphA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Epha7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Epha7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EphA7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Epha7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EphA7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EphA7 em células tumorais com expressão de Epha7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.