Plasmide Double Nickase (h) EphA4: sc-400729-NIC

EPHA4 code EphA4, un récepteur tyrosine kinase de la famille Eph/éphrine qui assure une signalisation dépendante du contact, essentielle au guidage axonal, à la plasticité synaptique et à la formation des frontières tissulaires. Lors de la liaison à des ligands éphrines, EphA4 déclenche une signalisation bidirectionnelle qui module le remodelage du cytosquelette, l’adhérence cellulaire et la migration via des voies impliquant les GTPases de la famille Rho, les cascades MAPK et la signalisation associée à PI3K. En biologie humaine, des altérations de la signalisation d’EphA4 ont été associées à une connectivité neuronale dérégulée et à des programmes anormaux de motilité cellulaire pertinents dans des contextes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’à des phénotypes liés à l’invasion dans des modèles de cancer. Ces caractéristiques font d’EPHA4 un nœud utile pour étudier le dialogue croisé entre récepteurs tyrosine kinases, la dynamique de la signalisation dépendante du ligand et les mécanismes de communication cellule–cellule.

EphA4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPHA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPHA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPHA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPHA4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.