Plasmide Double Nickase (h) EphA2: sc-400535-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EphA2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EphA2 Double Nickase (h) et le plasmide EphA2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EPHA2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EphA2 Antibody (C-3): sc-398832
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EphA2 | sc-400535-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EphA2 | sc-400535-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA2 code EphA2, un récepteur à activité tyrosine kinase de la famille des éphrines, qui assure une signalisation dépendante du contact pour réguler l’adhésion cellulaire, la répulsion et la formation de frontières tissulaires. L’activation d’EphA2 dépendante du ligand, ainsi que son interaction (crosstalk) avec les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK, des GTPases Rho et des adhésions focales, influencent la dynamique du cytosquelette, la migration et la prolifération. Dans les contextes épithélial et endothélial, EphA2 contribue à l’architecture des tissus et aux réponses angiogéniques, et des altérations de son expression ou de sa signalisation ont été associées à une croissance dérégulée et à des phénotypes invasifs dans de multiples modèles de maladie. Ces propriétés font d’EPHA2 un nœud utile pour disséquer la signalisation des récepteurs kinases, la communication cellule–cellule et le remodelage induit par le microenvironnement.
EphA2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPHA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPHA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPHA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPHA2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.