EphA1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420191-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EphA1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EphA1 Double-Nickase-Plasmid (m) und EphA1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Epha1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EphA1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420191-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420191-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Epha1 kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase EphA1, ein Mitglied des Eph/Ephrin-Signalsystems, das kontaktabhängige Kommunikation zwischen benachbarten Zellen vermittelt. Die Bindung an EphA1 reguliert Rezeptor-Clusterbildung und Tyrosinphosphorylierung, um Zytoskelett-Umbau, Zelladhäsion und gerichtete Migration zu steuern, und beeinflusst so während der Entwicklung die Ausbildung von Grenzen und die Gewebemusterung. Nachgeschaltete Signalwege greifen in Rho-GTPasen der Rho-Familie sowie in MAPK/ERK-assoziierte Signalachsen ein, die Zellbeweglichkeit und Wachstumsantworten prägen. Eine fehlregulierte EphA1-Aktivität wurde mit veränderter epithelialer Organisation und invasionsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Epha1 ein nützlicher Genlokus zur Untersuchung von Mechanismen mit Relevanz für die Tumorbiologie und Mikroenvironment-Interaktionen in Mausmodellen ist.
EphA1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Epha1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Epha1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Epha1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Epha1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.