Epac Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401807

Descripción general

RAPGEF3 codifica Epac (proteína de intercambio activada directamente por AMPc), un factor de intercambio de nucleótidos de guanina que conecta la señalización por AMPc con la activación de las pequeñas GTPasas Rap1 y Rap2. Epac modula la transducción de señales intracelulares en procesos que incluyen la adhesión celular, la regulación de la barrera endotelial, la secreción y las respuestas dependientes de calcio, a través de vías dependientes de AMPc que se cruzan con redes de señalización de PKA, MAPK e integrinas. En células humanas, la actividad de RAPGEF3/Epac influye en funciones vasculares y de células inmunitarias, y se ha estudiado en contextos como la regulación metabólica, la señalización inflamatoria y fenotipos de migración celular asociados a tumores. El análisis de la señalización AMPc–Rap dependiente de RAPGEF3 ayuda a aclarar cómo la dinámica de los segundos mensajeros determina la remodelación del citoesqueleto y los complejos de señalización compartimentalizados.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Epac (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RAPGEF3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RAPGEF3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RAPGEF3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Epac.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RAPGEF3 para la investigación de la señalización de Epac, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RAPGEF3 críticos para la función de Epac
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RAPGEF3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Epac CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Epac CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RAPGEF3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Epac (h) y el plásmido HDR Epac (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RAPGEF3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RAPGEF3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.