Epac Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401807

Panoramica

RAPGEF3 codifica Epac (exchange protein direttamente attivata da cAMP), un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina che collega la segnalazione del cAMP all’attivazione delle piccole GTPasi Rap1 e Rap2. Epac modula la trasduzione dei segnali intracellulari in processi che includono l’adesione cellulare, la regolazione della barriera endoteliale, la secrezione e risposte calcio-dipendenti attraverso vie dipendenti dal cAMP che intersecano le reti di segnalazione di PKA, MAPK e integrine. Nelle cellule umane, l’attività di RAPGEF3/Epac influenza funzioni vascolari e delle cellule immunitarie ed è stata studiata in contesti quali la regolazione metabolica, la segnalazione infiammatoria e i fenotipi di migrazione cellulare associati ai tumori. L’analisi della segnalazione cAMP–Rap dipendente da RAPGEF3 aiuta a chiarire come la dinamica dei secondi messaggeri plasmi il rimodellamento del citoscheletro e i complessi di segnalazione compartimentalizzati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Epac (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAPGEF3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAPGEF3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAPGEF3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Epac.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAPGEF3 per lo studio della segnalazione di Epac, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RAPGEF3 critici per la funzione di Epac
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAPGEF3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Epac CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Epac CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAPGEF3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Epac Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Epac (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAPGEF3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAPGEF3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.