Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) EP4: sc-401146-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)EP4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EP4 (h) y el plásmido de doble nickasa EP4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PTGER4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EP4 Anticuerpo (C-4): sc-55596
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) EP4 | sc-401146-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) EP4 | sc-401146-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTGER4 codifica el receptor humano de prostaglandina E2 EP4, un receptor acoplado a proteína G que señala principalmente a través de Gs para elevar el AMPc y activar programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB. EP4 también activa vías de señalización vinculadas a β-arrestina, PI3K/AKT y ERK/MAPK, coordinando la regulación de las respuestas inflamatorias, el tono vascular, la función de la barrera epitelial y la migración celular. En los compartimentos inmunitario y estromal, EP4 modula la producción de citocinas y el tráfico de leucocitos aguas abajo de la PGE2 derivada de COX, integrando la señalización de prostanoides con redes inmunorreguladoras más amplias. La actividad desregulada de PTGER4/EP4 se ha asociado con fenotipos inflamatorios crónicos y una homeostasis tisular alterada, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de la biología de enfermedades vinculadas a la inflamación.
EP4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PTGER4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PTGER4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PTGER4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PTGER4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.