Eos Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402330

Descripción general

IKZF4 (Eos) es un factor de transcripción con dedos de zinc de la familia Ikaros que regula programas de expresión génica que controlan la diferenciación, activación y tolerancia de los linfocitos. En las células T humanas, Eos se expresa de manera destacada en las células T reguladoras y contribuye a mantener su identidad supresora coordinando la represión transcripcional y el control asociado a la cromatina de genes efectores inmunitarios. Mediante su integración con redes transcripcionales y epigenéticas, IKZF4 influye en la capacidad de respuesta a la señalización de citocinas, en los estados de activación impulsados por el TCR y en la estabilidad del linaje. La disfunción de IKZF4/Eos se ha asociado con alteraciones de la homeostasis inmunitaria y se ha estudiado en contextos de autoinmunidad, inflamación y biología de la inmuno-oncología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Eos (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen IKZF4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del IKZF4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de IKZF4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Eos.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en IKZF4 para la investigación de la señalización de Eos, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de IKZF4 críticos para la función de Eos
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de IKZF4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Eos CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Eos CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus IKZF4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Eos (h) y el plásmido HDR Eos (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología IKZF4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana IKZF4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.