Plásmido CRISPR de Activación (h) Eos: sc-402330-ACT

IKZF4 (Eos) es un factor de transcripción con dedos de zinc de la familia Ikaros que actúa como regulador dependiente del contexto de la expresión génica en linajes hematopoyéticos, con funciones destacadas en la diferenciación de las células T y la homeostasis inmunitaria. Eos participa en la remodelación de la cromatina y en programas de represión/activación transcripcional que moldean las salidas de la señalización por citocinas y las redes transcripcionales específicas de linaje. Mediante interacciones con complejos correguladores, IKZF4 ayuda a coordinar decisiones de destino celular, umbrales de activación y el mantenimiento de fenotipos reguladores. La actividad desregulada de IKZF4 y los patrones de expresión alterados se han implicado en la fisiopatología mediada por el sistema inmune y se estudian por su contribución a la señalización inflamatoria y a estados transcripcionales asociados a enfermedades hematológicas.

Eos El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IKZF4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Eos El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IKZF4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IKZF4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Eos. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IKZF4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Eos en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Eos en células tumorales con expresión de IKZF4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.