Plasmide Double Nickase (h) envoplakin: sc-405420-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) envoplakin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide envoplakin Double Nickase (h) et le plasmide envoplakin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EVPL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: envoplakin Antibody (F-4): sc-137033
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) envoplakin | sc-405420-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) envoplakin | sc-405420-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EVPL code l’envoplakine, un cytolinker de la famille des plakines qui contribue à l’enveloppe cornée ainsi qu’aux réseaux protéiques associés aux desmosomes dans les épithéliums stratifiés. L’envoplakine assure l’intégration des filaments intermédiaires aux complexes jonctionnels afin de soutenir la différenciation des kératinocytes, la formation de la barrière et la résistance mécanique, en lien avec l’organisation du cytosquelette et les processus d’adhérence cellule–cellule. Une expression altérée d’EVPL ou une perturbation de l’assemblage de l’enveloppe a été associée à une fragilité épithéliale et à des programmes de différenciation anormaux, faisant d’EVPL un marqueur utile et un point d’entrée mécanistique pour l’étude de l’homéostasie cutanée et muqueuse. En biologie du cancer, l’envoplakine et d’autres composants de l’enveloppe sont fréquemment étudiés dans le contexte du remodelage épithélial et de la dérégulation de l’adhérence au cours de la progression tumorale.
envoplakin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EVPL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EVPL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EVPL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EVPL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.