Plasmide CRISPR d'Activation (h) Enterokinase HC: sc-403764-ACT

TMPRSS15 code l’entérokinase, une sérine protéase transmembranaire de type II exprimée à la bordure en brosse de l’intestin grêle proximal, où elle initie des cascades protéolytiques digestives en convertissant le trypsinogène en trypsine. Cette étape d’activation amplifie le traitement en aval de nombreux zymogènes pancréatiques, reliant TMPRSS15 à la signalisation par les protéases et à la digestion luminale des protéines. Une activité altérée de l’entérokinase est associée à une absorption protéique déficiente et à un dysfonctionnement intestinal, et ce gène est utilisé comme marqueur de la différenciation des entérocytes et de la maturation épithéliale. Comme l’activation des protéases influence la gestion des nutriments et l’homéostasie muqueuse, TMPRSS15 est pertinent pour les études de la physiologie gastro-intestinale et de la biologie de la barrière épithéliale.

Enterokinase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMPRSS15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Enterokinase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMPRSS15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMPRSS15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Enterokinase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMPRSS15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Enterokinase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Enterokinase dans les cellules tumorales présentant une expression de TMPRSS15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.