Plásmido Doble Nickase (h) ENT4: sc-405115-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ENT4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ENT4 (h) y el plásmido de doble nickasa ENT4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SLC29A4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ENT4 Anticuerpo (SA-18): sc-101295
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ENT4 | sc-405115-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ENT4 | sc-405115-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **SLC29A4** codifica el **transportador equilibrativo de nucleósidos 4 (ENT4)**, un miembro de la familia SLC29 que media el transporte bidireccional de nucleósidos y cationes orgánicos relacionados a través de las membranas celulares según gradientes de concentración. La actividad de ENT4 contribuye a la vía de rescate de nucleósidos y al metabolismo de purinas, influyendo en los reservorios intracelulares de nucleótidos y, de este modo, acoplando el transporte de membrana con la síntesis de ADN/ARN y una homeostasis metabólica más amplia. El transporte mediado por ENT4 es sensible a las condiciones extracelulares y puede intersectar con respuestas celulares al estrés que remodelan la demanda y la señalización de nucleótidos. La alteración de la función de SLC29A4/ENT4 se ha investigado en el contexto de una gestión desregulada de nucleósidos y de fenotipos impulsados por metabolitos relevantes para la investigación de enfermedades neurológicas y metabólicas.
ENT4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC29A4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC29A4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC29A4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC29A4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.