Plásmido CRISPR de Activación (h) Enigma: sc-403254-ACT

El PDLIM7 humano codifica Enigma, un adaptador con dominios PDZ–LIM que se localiza en el citoesqueleto de actina y en estructuras asociadas a las adhesiones focales, conectando complejos de señalización con la remodelación del citoesqueleto. Enigma participa en la mecanotransducción y en programas de motilidad celular al coordinar interacciones proteína–proteína dentro de redes de adhesión y fibras de estrés, influyendo en vías que regulan la arquitectura y la diferenciación celulares. Gracias a sus funciones de andamiaje, PDLIM7 se ha estudiado en contextos relacionados con la organización del músculo cardíaco y esquelético, donde la integridad del citoesqueleto y la regulación transcripcional están estrechamente acopladas. En la literatura, la expresión o localización desregulada de PDLIM7 se ha asociado con fenotipos de migración celular y remodelado tisular alterados, relevantes para la biología cardiovascular y oncogénica.

Enigma El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PDLIM7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Enigma El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PDLIM7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PDLIM7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Enigma. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PDLIM7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Enigma en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Enigma en células tumorales con expresión de PDLIM7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.