Plasmide CRISPR/Cas9 KO ENDOG (m): sc-420176

Présentation

Endog code l’endonucléase G (ENDOG), une nucléase mitochondriale impliquée dans le métabolisme de l’ADN mitochondrial et dans la dégradation contrôlée des acides nucléiques lors du stress cellulaire. ENDOG participe à des voies associées à une fragmentation de l’ADN de type apoptotique, à l’entretien du génome mitochondrial et, plus largement, à l’homéostasie mitochondriale, susceptible d’influencer la phosphorylation oxydative ainsi que la signalisation par les espèces réactives de l’oxygène. Une activité altérée d’ENDOG a été associée à une dérégulation de la fonction mitochondriale et de l’intégrité du génome, des processus pertinents dans des modèles de neurodégénérescence, de dysfonction cardiométabolique et de stress inflammatoire. Dans les systèmes murins, Endog constitue un point d’entrée pratique pour étudier la communication mitochondrie–noyau et les décisions de destinée cellulaire en réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ENDOG (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Endog dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Endog, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Endog à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ENDOG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Endog pour l'étude de la signalisation de ENDOG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Endog essentiels à la fonction de ENDOG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Endog pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ENDOG plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ENDOG plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Endog. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ENDOG plasmide HDR (m) et le ENDOG (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Endog pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Endog définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.