Emx2 Lentiviral Activation Particles (m): sc-420170-LAC

Mouse Emx2 kodiert einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Embryonalentwicklung die regionale Identität festlegt und dabei insbesondere an der Musterbildung von Vorderhirn, Großhirnrinde und Sinnesorganen beteiligt ist. EMX2 wirkt in genregulatorischen Netzwerken, die die Proliferation von Vorläuferzellen, die neuronale Differenzierung und die Gewebemorphogenese koordinieren, und ist dabei in Entwicklungs-Signalwege wie Wnt/β-Catenin, FGF und BMP eingebunden. Im Nervensystem beeinflusst Emx2 die Arealisierung der Großhirnrinde und die laminale Organisation, indem es Transkriptionsprogramme reguliert, die Zellschicksal und Verschaltung prägen. Eine fehlregulierte EMX2-Expression oder -Aktivität wird mit neuroentwicklungsbedingten Auffälligkeiten und veränderten Differenzierungszuständen in Verbindung gebracht, was EMX2 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung entwicklungsbiologischer Genkontrolle und Linienspezifikation in Mausmodellen macht.

Emx2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Emx2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Emx2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Emx2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Emx2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Emx2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.