Plásmido CRISPR de Activación (m) Emx2: sc-420170-ACT

Emx2 codifica un factor de transcripción homeobox que ayuda a establecer la identidad del telencéfalo dorsal y la regionalización areal de la corteza durante la embriogénesis del ratón, coordinando la proliferación de progenitores, la diferenciación neuronal y el patrón regional. Actúa dentro de redes reguladoras génicas que integran señales de morfógenos y factores de crecimiento, incluidas interacciones con las vías de señalización WNT/β-catenina, FGF y SHH, para moldear el desarrollo del prosencéfalo y la formación del límite mesencéfalo–rombencéfalo. En tejidos adultos, Emx2 contribuye a la dinámica de las células madre neurales y a la especificación de circuitos, vinculando su dosis con fenotipos del neurodesarrollo y con una organización cortical alterada. La expresión desregulada de EMX2 se ha asociado con malformaciones cerebrales del desarrollo y se ha estudiado en el contexto de la biología tumoral y de programas de linaje epitelial, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del control transcripcional y del destino celular.

Emx2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Emx2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Emx2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Emx2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Emx2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Emx2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Emx2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Emx2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Emx2 en células tumorales con expresión de Emx2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.