Plásmido Doble Nickase (h) EMR1: sc-400698-NIC

ADGRE1 codifica EMR1, un receptor de adhesión acoplado a proteína G expresado predominantemente en células del linaje mieloide, donde favorece las interacciones célula–célula y la vigilancia inmunitaria dentro de los microambientes tisulares. Como miembro de la familia EGF-TM7, EMR1 contribuye a la adhesión de leucocitos y a procesos de señalización vinculados a la remodelación del citoesqueleto y a la migración celular regulada. La expresión de EMR1 se utiliza ampliamente para anotar estados asociados a macrófagos y eosinófilos, por lo que es relevante para estudios sobre la regulación de la inflamación y la diferenciación de células inmunitarias. Los patrones de activación mieloide desregulada y de infiltración tisular que se correlacionan con poblaciones EMR1-positivas se examinan con frecuencia en contextos de inflamación crónica y en paisajes inmunitarios asociados a tumores.

EMR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADGRE1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADGRE1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADGRE1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADGRE1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.