Plásmido CRISPR de Activación (h) EMP-3: sc-407036-ACT

La proteína 3 de la membrana epitelial (EMP3) es una proteína asociada a la membrana de tipo tetraspan implicada en la regulación de las interacciones célula–célula, la organización de la membrana y programas de transducción de señales que determinan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. En células humanas, EMP-3 se ha relacionado con la modulación de la señalización de receptores tirosina cinasa, el tráfico endosomal y la dinámica del citoesqueleto, influyendo en procesos como la adhesión y la migración. Se han descrito alteraciones en la expresión de EMP3 y en los patrones de metilación de su promotor en múltiples contextos tumorales, donde el estado de EMP3 se estudia con frecuencia en relación con la plasticidad del estado celular y la señalización asociada al microambiente tumoral. Estas características hacen de EMP3 un nodo útil para analizar circuitos de señalización próximos a la membrana y programas transcripcionales relevantes para la biología de la enfermedad.

EMP-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EMP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EMP-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EMP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EMP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EMP-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EMP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EMP-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EMP-3 en células tumorales con expresión de EMP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.