Plásmido CRISPR de Activación (m) EMMPRIN/CD147: sc-419369-ACT

El gen **Bsg** de ratón codifica **EMMPRIN/CD147**, una glucoproteína de la superfamilia de las inmunoglobulinas, de expresión amplia, que regula las interacciones célula–célula, la remodelación de la matriz extracelular y el acoplamiento metabólico en múltiples tejidos. **CD147** promueve la inducción de metaloproteinasas de la matriz y facilita el tráfico de los transportadores de monocarboxilatos (**MCT1/MCT4**), vinculando el transporte de lactato con la reprogramación glucolítica y la dinámica del microambiente tisular. Participa en procesos como el tráfico de leucocitos, la señalización angiogénica y la comunicación epitelio–estroma, lo que hace de **Bsg** un nodo útil para estudiar la inflamación, la fibrosis y las interacciones tumor–estroma. La actividad alterada de **CD147** se ha asociado con un recambio patológico de la matriz y fenotipos invasivos, aportando relevancia mecanística en modelos de biología cardiopulmonar, renal y del cáncer.

EMMPRIN/CD147 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Bsg sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EMMPRIN/CD147 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Bsg en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Bsg, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EMMPRIN/CD147. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Bsg y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EMMPRIN/CD147 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EMMPRIN/CD147 en células tumorales con expresión de Bsg silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.