Plásmido Doble Nickase (m) EMID1: sc-431233-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)EMID1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EMID1 (m) y el plásmido de doble nickasa EMID1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Emid1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EMID1 Anticuerpo (G-12): sc-390288
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) EMID1 | sc-431233-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) EMID1 | sc-431233-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EMID1 (que contiene el dominio EMI 1) es una proteína secretada asociada a la matriz extracelular, implicada en la organización de las matrices pericelulares y en la modulación de las interacciones célula–matriz durante el desarrollo y la homeostasis tisular en el ratón. Por su localización en la MEC y sus módulos predichos de interacción proteína–proteína, EMID1 se estudia en el contexto de la señalización dependiente de la adhesión, el ensamblaje de la membrana basal y la regulación de procesos morfogenéticos que influyen en la migración y la diferenciación celulares. La desregulación de la composición y la remodelación de la MEC es una característica común de la fibrosis, las anomalías del desarrollo y los cambios en el microambiente tumoral, lo que convierte a Emid1 en una diana relevante para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por la matriz. Los modelos murinos de Emid1 pueden ayudar a dilucidar cómo los componentes de la MEC coordinan salidas de señalización que afectan la arquitectura tisular y las respuestas al estrés.
EMID1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Emid1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Emid1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Emid1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Emid1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.