Plasmide Double Nickase (h) Elk-1: sc-400385-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Elk-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Elk-1 Double Nickase (h) et le plasmide Elk-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ELK1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Elk-1 Antibody (E-5): sc-365876
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Elk-1 | sc-400385-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Elk-1 | sc-400385-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELK1 code le facteur de transcription Elk-1, doté d’un domaine ETS, un effecteur nucléaire de la signalisation MAPK/ERK qui relie les signaux extracellulaires de facteurs de croissance et de stress à des réponses transcriptionnelles rapides. Après phosphorylation par ERK, JNK ou p38, Elk-1 coopère avec le serum response factor (SRF) au niveau des éléments de réponse au sérum (SRE) pour réguler des gènes précoces immédiats contrôlant la prolifération, la différenciation, la plasticité neuronale et l’apoptose. Une activité dérégulée d’ELK1 a été associée à des programmes de signalisation oncogéniques ainsi qu’à des processus inflammatoires et neurodégénératifs aberrants, ce qui en fait un nœud utile pour étudier une transcription dépendante des stimuli et le remodelage de la chromatine. Dans les cellules humaines, Elk-1 intègre également les interactions (crosstalk) entre voies de kinases avec un contrôle transcriptionnel proximal au promoteur, ce qui soutient des études mécanistiques de la transduction du signal et des réseaux de régulation génique.
Elk-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELK1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.