eIF4B Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402494-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- eIF4BO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase eIF4B (h) e o Plasmídeo Double Nickase eIF4B (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para EIF4B. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:eIF4B Anticorpo (D-4): sc-376062
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
eIF4B Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402494-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF4B Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402494-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4B codifica a eIF4B, um fator acessório de iniciação da tradução que aumenta a atividade de helicase de RNA da eIF4A e favorece o recrutamento de ribossomos para mRNAs estruturados durante a iniciação dependente de cap. Por meio de suas interações com o complexo eIF4F e da fosforilação regulatória a jusante das vias de sinalização PI3K–AKT–mTOR e MAPK, a eIF4B ajuda a ajustar a produção translacional durante o crescimento, as respostas ao estresse e a progressão do ciclo celular. Alterações na expressão ou no estado de ativação de EIF4B têm sido associadas a programas desregulados de síntese proteica que contribuem para a sinalização oncogênica e a proliferação celular aberrante. Como um nó que conecta vias de sinalização à tradução seletiva de mRNAs, EIF4B é frequentemente estudado em mecanismos que controlam a proteostase, a dinâmica de grânulos de estresse e a regulação da apoptose e do metabolismo dependente de tradução.
eIF4B O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EIF4B em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EIF4B. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EIF4B. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EIF4B interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.