Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
eIF4AI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420146
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- eIF4AI Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im eIF4AI-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eIF4AI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-420146 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Eif4a1 kodiert die murine DEAD-Box-RNA-Helikase eIF4AI, eine zentrale Komponente der eIF4F-Translationsinitiationsmaschinerie, die strukturierte 5′-UTRs entwindet und dadurch Ribosomen-Scanning sowie Startcodon-Erkennung ermöglicht. Durch ATP-abhängiges Remodeling der mRNA-Sekundärstruktur unterstützt eIF4AI die cap-abhängige Translation und beeinflusst Proteostase, Stressanpassung und Zellzyklusprogression. Seine Aktivität ist mit der mTOR-regulierten Kontrolle der Proteinsynthese verknüpft und kann selektive Translationsprogramme prägen, die Wachstum, Stoffwechsel und Differenzierung beeinflussen. Veränderte Dynamiken der Translationsinitiation unter Beteiligung von Helikasen der eIF4A-Familie wurden mit onkogenen Signalwegen, neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und einer Fehlregulation von Stressantworten in Verbindung gebracht, wodurch Eif4a1 einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien der Translationskontrolle darstellt.
Das eIF4AI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Eif4a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Eif4a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Eif4a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die eIF4AI-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Eif4a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der eIF4AI-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Eif4a1-Exone abzielen, die für die eIF4AI-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Eif4a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom eIF4AI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom eIF4AI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Eif4a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das eIF4AI HDR-Plasmid (m) und eIF4AI HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Eif4a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Eif4a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.