EID-1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-425516-ACT

Mouse EID-1 (Eid1) kodiert einen mit EP300/CBP interagierenden Differenzierungsregulator, der als transkriptioneller Modulator an der Schnittstelle von Chromatin-Remodeling und Zellzykluskontrolle wirkt. EID-1 wird mit der Regulation der RB/E2F-abhängigen Transkription und von Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht und beeinflusst damit die Proliferationsfähigkeit sowie die Linienfestlegung in sich entwickelnden und adulten Geweben. Über Interaktionen mit transkriptionellen Koregulatoren kann es Genexpressionsnetzwerke mitprägen, die an Wachstumsarrest, Stressantworten und der Gewebehomöostase beteiligt sind. Eine fehlregulierte, EID1-assoziierte transkriptionelle Kontrolle ist für Studien zu abweichenden Proliferations- und Differenzierungszuständen relevant, einschließlich Modellsystemen für onkogene Signalwege und entwicklungsbiologische Phänotypen.

EID-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Eid1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EID-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Eid1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Eid1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EID-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Eid1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EID-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EID-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Eid1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.