EHMT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402460

Descripción general

EHMT1 (metiltransferasa 1 de lisina de histonas en eucromatina) codifica una metiltransferasa con dominio SET que cataliza principalmente la mono- y dimetilación de la lisina 9 de la histona H3 (H3K9me1/2), promoviendo la represión transcripcional dentro de la eucromatina. Como parte de complejos reguladores epigenéticos con socios como EHMT2/G9a, EHMT1 ayuda a moldear la accesibilidad de la cromatina, coordinar programas de expresión génica específicos de linaje y estabilizar la identidad celular durante el desarrollo y la diferenciación. La metilación de H3K9 dependiente de EHMT1 se integra con la metilación del ADN y la organización de la heterocromatina para influir en la estabilidad del genoma y en la regulación génica a larga distancia. La desregulación de la actividad o la dosis de EHMT1 se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y a una expresión génica neuronal alterada, y se estudia en contextos que incluyen la función sináptica, vías relacionadas con la cognición y mecanismos de enfermedad asociados a la cromatina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EHMT1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EHMT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EHMT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EHMT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EHMT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EHMT1 para la investigación de la señalización de EHMT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EHMT1 críticos para la función de EHMT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EHMT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EHMT1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EHMT1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EHMT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EHMT1 (h) y el plásmido HDR EHMT1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EHMT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EHMT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.